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                生物实验室洁净实验室微生物检测

                洁净室(区)微生物可检测沉降菌或浮游菌。沉降菌检测是通过自然沉降原理,收集空气中的生物粒子于培养基平皿中,经若干时间,在适宜的条件下让其繁殖到可见的菌♀落进行计数,以平板培养皿中的菌落数来判定洁净环境内的活微生物数,并以此来评定洁净室(区)的洁净度。浮游菌的检测是采用计数浓度法,即通过收集悬浮在空气中生物粒子于专门的培养基,经若干时间,在适宜的生长条件下其繁殖到可见的菌落进々行计数,从而判定洁净环境内单位体积空气中的活微生物数,以此来评定洁净室(区)的洁净度。实际检测浮游菌和∩沉降菌时,先确认洁净室(区)的检测条件能否达∮到级别要求。达到要求后,测试人员和检测仪器等按洁净室(区)的进出◥规定(如穿戴符合环境◢级别的工作服、紫外照射、仪器外体消毒等)进出洁净实验室(区),测试人员先测量测试区域的面♂积和体积,确定采样次数和采样点。浮游菌确定采样量后按仪器操作规程操作,把空气中悬浮的微生物采集到肉汤琼脂培▽养基上。沉降菌确定采样时间后直接把培养基裸露在空气中,让空气中的微生物↙自动降落在肉汤琼脂培养基上。采样∑要点见表4~7。采集完的培养基需在30℃~35℃培养箱中培养,时间≥48h。同时选定不少于3只培㊣ 养基作空白对照培养。
                微生物检测时需注意:
                1.检测▲前应仔细检查每个培养皿的质量,不能使用有变质、破损或污染的培养基和培养皿。
                2.采取一切措施防止采样管的污染和其他人为对样本的污染。
                3.对培养基、培养条件及其他参数作详细的记录。
                4.由于细菌种类繁多,差别甚大,计数时一般用☉透射光于培养皿背面或正面仔细观察,不要漏计培养皿边缘生长的菌落,并须注意细菌菌落或培养基沉淀物的区别,必要时用显微镜鉴别。
                5.若在本实验室以外的环境中进行检测,则培养基在整个运输过程中必须▓对温度进行控制,培养基需放在含有冰块的、消毒过的运输箱内,温度控制在※0℃~4℃,并在记录中记录运输温度。
                4              洁净室(区)浮游菌的检测要点
                参数指标 浮游菌
                检测依据 JGJ71-90、GB/T16293-1996[3]
                检测条件 1. 风速或换气次数和静压差达到级别要求,温、湿度须达到规定的要求。
                2. 浮游菌测试前,被测试洁净室(区)已经过消毒。
                3.对单向流,如100级净化房间及层流工作台,测试应在净化空调系统正常』运行≥10min后开始。
                4.对非单向流,如10 000级,100 000级以上的净化房间,测试应在净化空调系统正常运行≥30 min后开始。

                         
                1.测点位置离地0.8m~1.5m左右(略高于工作面)。
                2.送风口测点位置离开送风面30cm左右。
                3.可在关键设备或关键工作活动范围处增加测点。
                采样点数」目和次数 浮游菌测试的最少采样点数目分为日常监测及环境验证两种情况,见表5。每个采样点一般采样一次。
                1)对每个100级洁净操作区域(如层流罩、层流工作台),可在离药物敞开口处30cm处设测点,每班一次。
                2)对每个10 000级洁净工▅作区域(如药物开口工作区),可在工作面处设测点,每班一次。
                采样量根据日常监测及环境验证确定,每次最小①采样量见表6。
                结果报告 以检测区域的浮游菌最大菌落浓度(个/m3)进行报告。
                5             洁净室(区)浮游菌检测的采样点数目
                   
                m2
                       
                100 10 000 100  000或300 000
                验证 监测 验证 监测 验证 监测
                <10 2~3 1 2 1 2
                ≥10~<20 4 2 2 1 2
                ≥20~<40 8 3 2 1 2
                ≥40~<100 16 4 4 1 2
                ≥100~<200 40 10 3
                ≥200~<400 80 20 6
                400 160 40 13
                注:1)表1中的面积,对于100级的单向流洁净室(包括层流工作台),指的是送风口表面积,对于10 000级,100 000级,300 000级的非单向流洁净室,指的是房间面积。
                2)日常监测的采样点数目由生产工艺的关键操作点来确定。
                6           洁净室(区)浮游菌检测々的最小采样量
                洁净度级别 采样量,L/
                日常监测 环境验证
                100级 600 1 000
                10 000级 400 500
                100 000级 0 100
                300 000级 0 100
                生物洁净∮实验室
                7                   洁净室(区)沉降菌的检测要点
                参数指标 沉降菌
                检测依据 JGJ71-90、GB/T16294-1996[4]
                检测条件 同浮游菌。
                采样点位置 1.工作区采样点的位置离地0.8m~1.5m左右(略高于工作面)。
                2.可在关键设备或关键工作活动范围处增加采样点△。
                采样点数目 沉降法的最少采样点数可按表8确定。
                采样量 应满足最少培养皿数,见表9。
                结果报告 以检测区域的最←大菌落数(个/皿)进行报告。
                8         洁净室(区)沉降菌检测的最少采样点数目
                面    积m2 洁 净 度 级 别
                100 10 000 100  000或300 000
                <10 2~3 2 2
                ≥~<20 4 2 2
                ≥~<40 8 2 2
                ≥40~<100 16 4 2
                ≥100~<200 40 10 3
                ≥200~<400 80 20 6
                ≥400~<1000 160 40 13
                ≥1 000~<2 000 400 100 32
                2000 800 200 63
                注:表中的面积,对于单向流洁净室,指的是送风面面积;对非单向流洁净室,是指的房间面积。
                9         洁净室(区)沉降菌检测的最少培养皿数
                洁净度级别 所需φ90mm培养皿数(以沉降0.5h 计)
                100 14
                10 000 2
                100 000或300 000 2

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